Interview with Dr. Francesca Molinari, Istituto Cantonale in Locarno

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INTERVIEW MIT DR. FRANCESCA MOLINARI, ISTITUTO CANTONALE, LOCARNO

Frau Dr. Molinari, das Istituto Cantonale di Patologia in Locarno hat sich kürzlich für den neuen Seegene Anyplex™ II HPV28 Test entschieden, der simultan 28 Humane Papillomviren auf einem Real-Time PCR Instrument detektiert, genotypisiert und semi-quantifiziert. Warum?
Wir haben beschlossen den Anyplex™ II HPV28 Test von Seegene zu testen und ihn dann in der Routinediagnostik anzuwenden, da die Ausführung des Tests sehr einfach ist und die Zeit bis zum Erhalt eines Typisierungsergebnisses deutlich schneller ist, im Vergleich zum Typisierungsverfahren, welches wir zuvor verwendet haben. Darüber hinaus ist die Semiquantifizierung der Viruslast von zytologischen Proben ein weiterer Vorteil dieses Tests, welche bei der Überwachung von persistenten Infektionen berücksichtigt werden kann.
Früher haben Sie cytologische Proben lediglich auf HPV16/18 getestet. Nun testen Sie mit dem Seegene Assay ganze 28 High- und Low-Risk Pamillomaviren. Wo liegen die Vorteile für Ärzte und Patientinnen?
Die Strategie, die wir aktuell zur HPV-Analyse von zytologischen Proben an unserem Institut verwenden, sieht einen ersten Test (COBAS HPV-Test (Roche)) vor, welcher die Extraktion der DNA aus den Proben sowie die Identifizierung der Virustypen 16 und 18 sowie 11 weitere nicht 16, nicht 18 klassifizierte Hochrisiko-Virustypen ermöglicht. Der Seegene Test wird bei den so gwonnenen DNA-Extrakten von nicht 16, nicht 18 klassifizierte Hochrisiko-Virustypen angewandt, um den genauen Virustyp zu bestimmen. Der Test von Seegene wird ausserdem bei zytologischen Proben durchgeführt, die keine HPV Infektion auf dem COBAS aufweisen, welche jedoch persistierende hochgradige oder niedriggradige Läsionen oder eine fragliche zytologische Läsion aufweisen. Die korrekte und genaue Virus-Genotypisierung hat eine besondere klinische Relevanz, da sie es ermöglicht einen bestimmten infektiösen Virustypen zu bestimmen und zu verfolgen und somit persistierende Infektionen oder Infektionen, welche mit einem erhöhten Risiko verbunden sind, hochgradige zytologische Läsionen zu entwickeln, zu überwachen. Zudem ist mit der Einführung von immer breitgefächerteren HPV-Impfungen eine genaue Typisierung notwendig, die nicht nur auf die Erkennung der Virustypen 16 und 18 begrenzt ist.
Sie haben den Anyplex™ II HPV28 Test am Kongress ‘PAP-Test, HPV e vaccino’ vorgestellt. Wie waren die Reaktionen?
Ziel der Präsentation war es, den Gynäkologen die Wichtigkeit der Virustypisierung und die Auswahl der Patientinnen für welche die Durchführung des HPV Tests wichtige klinische Informationen liefern kann, bewusst zu machen. Das anwesende Publikum war interessiert und neugierig einige Aspekte, die Typisierung und Quantifizierung der Viruslast betreffend, zu vertiefen.
Sie haben den Anyplex™ II HPV28 Test für FFPE Proben validiert. Wie waren Ihre Erfahrungen?
Es wurden 56 Fälle von extrahierten FFPE-Proben mit dem Anyplex™ II HPV28 Test untersucht, welche zuvor mit dem Typisierungsverfahren INNO-Lipa HPV Genotyping Extra (Innogenetics) untersucht wurden. In 50 Fällen (90%) waren die erhaltenen Typisierungsergebnisse perfekt übereinstimmend zwischen den beiden Methoden. In zwei Fällen hat der Seegene Test das Vorhandensein von Low-risk-Virustypen detektiert, die mit der Innolipa Methode nicht detektiert wurden. In 4 Fällen sind die Ergebnisse zwischen beiden Methoden jedoch diskordant in Bezug auf die Identifizierung von High-risk Virustypen: besonders in 3 Fällen wurde ein High-risk Virustyp von der Innolipa Methode und nicht vom Anyplex Test erkannt (2 von 3 Virusinfektionen waren wahrscheinlich an der Detektionsgrenze), während in einem Fall eine 16er High-risk Infektion nur vom Anyplex und nicht vom Innolipa Test erkannt wurde.
Wo liegen die Vorteile gegenüber dem Streifentest, den Sie bis anhin durchgeführt haben?
Der Anyplex™ II HPV28 Test ist im Vergleich mit dem zuvor verwendeten Test für die Typisierung von Viren wesentlich einfacher und schneller und ermöglicht zudem eine Semiquantifizierung der Viruslast.
Wie ist die Evaluation verlaufen und wie zufrieden waren Sie mit den Resultaten?
Der Anyplex™ II HPV28 Test ist ein ausgezeichneter, schneller und sowohl in der Durchführung als auch in der Auswertung der Ergebnisse, einfacher Test. Wir haben kürzlich an der von der WHO organisierten « HPV DNA Proficiency Study 2014 » Qualitätskontrolle teilgenommen, welche wir erfolgreich bestanden haben. Aus dem erhaltenen Bericht wird der folgende Satz zitiert: « …your data set using the Seegene Anyplex II H28 assay is proficient for detection of HPV 6, 11, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68a and 68b ».
Wie zufrieden sind Sie mit dem Service und dem Support von BÜHLMANN?
Ich bin sehr zufrieden mit dem Service und Support von BÜHLMANN. Die ersten Tests, die Installation der Software, welche für die Durchführung der Messungen benötigt wird und das Training werden in einer zweitägigen Schulung vor Ort von hochspezialisierten und gut vorbereiteten Mitarbeitern durchgeführt. Zudem werden Fragen oder technische Probleme immer schnell und effektiv beantwortet.
Vielen Dank für das Gespräch.

ENTRETIEN AVEC DR. FRANCESCA MOLINARI, ISTITUTO CANTONALE, LOCARNO

Madame Dr. Francesca Molinari de l’Institut Cantonal de Pathologie à Locarno a décidé d’évaluer le test de Seegene Anyplex™ II HPV28. Ce test permet de tester simultanément 28 virus du Papillome Humain sur un équipement de PCR en temps réel permettant un génotypage et une semi quantification. Voici les raisons de cette évaluation.
Nous avons décidé d’évaluer le test Anyplex™ II HPV28 Test de Seegene dans le but de l’utiliser ensuite en routine. En effet ce test est facile à réaliser, et l’obtention des résultats de génotypage est nettement plus rapide, en comparaison du système que nous utilisions précédemment. Le fait qu’il permette une quantification du virus sur un échantillon de cytologie est un grand avantage. Ceci permet un meilleur suivi des infections persistantes.
Vous testiez auparavant les échantillons de cytologie uniquement pour les type HPV16 et HPV18. Maintenant grâce à Seegene vous pouvez tester les 28 génotypes à hauts et bas risques du virus papillome. Quels en est l’avantage pour les médecins et les patients?
La stratégie que nous avions dans notre institut pour effectuer les analyses HPV dans les échantillons de cytologie était d’utiliser le test de Roche (COBAS HPV-Test). Ce test permet l’extraction de l’ADN des échantillons. L’identification des types 14 et 18 et d’un groupe de 11 virus à hauts risques n’indiquant pas le genotpye. Le test de Seegene est important car il permet la détermination et le génotypage simultané de chacun des virus. Le test de Seegene est également utilisé pour des échantillons cytologiques ayant un résultat n’indiquant pas une infection avec le test COBAS HPV, mais qui comportent une persistance et/ou des lésions à haut risques et/ou bas risques.
Le génotypage correcte et précis est cliniquement nécessaire car il permet une meilleure détermination du type du virus, ainsi qu’un meilleur suivi des infections à haut risques pouvant potentiellement se développer en lésions cytologiques. Avec l’introduction des vaccins HPV qui couvrent de plus en plus de virus HPV, le génotypage devient une nécessité car la détection seule des virus 16 et 18 ne suffit plus.
Vous avez présenté le test Anyplex™ II HPV28 Test au congrès ‘PAP-Test, HPV e vaccino’. Quelles ont été les réactions ?
Le but de cette présentation était de sensibiliser les gynécologues afin qu’ils prennent conscience de l’importance de l’introduction d’un test de génotypage pour certains patients pour lesquelles ces informations apporteraient des données cliniques cruciales. L’audience a également souhaité approfondir certains aspects liés aux questions sur le génotypage ainsi qu’à la quantification des virus HPV.
Vous avez validé le test Anyplex™ II HPV28 pour des échantillons de FFPE. Quelle a été votre expérience dans cette démarche?
56 échantillons ont été extraits de prélèvements FFPE et évalués avec le test Anyplex™ II HPV28. Ces échantillons avaient été également testés et genotypés en utilisant la méthode « INNO-Lipa Extra » de la compagnie Innogenetics. Dans 50 cas (soit 90%) les résultats des deux méthodes étaient équivalents et comparables. Dans deux cas le test Anyplex™ II HPV28 de Seegene a détecté des virus à bas risques que le test INNO-Lipa Extra n’a pas trouvés. Dans 4 cas les résultats étaient discordants dans l’identification de virus à hauts risques. Le test « INNO-Lipa Extra » a trouvé des virus à hauts risque alors que le test Anyplex™ II HPV28 ne les a pas détectés (ceci dû au fait que 2 des 3 virus étaient à un seuil de détection limite), alors que dans 1 cas seul le test Anyplex a trouvé un haut risque HPV16 manqué par la méthode INNO-Lipa Extra.
Quels sont les avantages de la méthode de Seegene en comparaison des bandelettes que vous avez utilisé jusqu’à ce jour ?
Anyplex™ II HPV28 est un excellent test. Il est facile à utiliser, rapide autant dans sa réalisation que dans l’interprétation de ses résultats. Nous avons également pris part au contrôle externe de qualité organisé par l’OMS (HPVDNA Proficiency Study 2014 WHO) que nous avons passé avec succès. Sur le rapport que nous avons reçu il était également indiqué : » Les résultats obtenus en utilisant la méthode Anyplex™ II HPV28 démontrent une grande compétence dans la détection des HPV 6, 11 ,16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68a et 68b.
Quel est votre niveau de satisfaction concernant le service et le soutien de la compagnie BÜHLMANN ?
Je suis vraiment satisfaite du service et du soutien de la compagnie BÜHLMANN. L’installation des programmes informatiques, le training et les premiers tests effectués ont été réalisés en deux étapes sur place et avec l’appui d’excellents spécialistes de produits très bien préparés. De plus, nos questions ou les problèmes techniques rencontrés sont toujours traités de manière efficaces et rapides.
Nous vous remercions pour cet entretien.
 

INTERVISTA CON SIGNORA DR. FRANCESCA MOLINARI, ISTITUTO CANTONALE DI PATOLOGIA DI LOCARNO

Dottoressa Molinari, l’Istituto Cantonale di Patologia di Locarno ha recentemente optato per il nuovo test Anyplex™ II HPV28 di Seegene che rileva, genotipizza e semi-quantifica simultaneamente 28 tipi di papillomavirus umani con uno strumento Real-time PCR. Perché?
Abbiamo deciso di testare e poi di utilizzare in routine diagnostica il test Anyplex™ II HPV28 di Seegene perchè l’esecuzione del test è molto semplice e le tempistiche per ottenere un risultato di tipizzazione decisamente piu’ rapide rispetto alla metodica di tipizzazione che utilizzavamo in precedenza. Inoltre la semiquantificazione della carica virale nei campioni citologici è un ulteriore valore aggiunto di tale test che puo’ essere tenuta in considerazione nel monitoraggio delle infezioni persistenti.
In precedenza i campioni citologici sono stati testati solo su HPV 16/18. Ora con il test di Seegene testate 28 papillomavirus a basso e alto rischio. Quali sono i vantaggi per medici e pazienti?
La strategia che utilizziamo attualmente presso il nostro istituto per l’analisi HPV nei campioni citologici prevede un primo test (COBAS HPV test (Roche)) che permette di estrarre il DNA dai campioni in esame e di identificare i tipi virali 16 e 18 e 11 altri tipi virali ad alto rischio classificandoli come alto rischio non 16-non 18. Il test Seegene viene effettuato sul DNA estratto con la precedente metodologia di campioni classificati come alto rischio non 16-non 18 per identificare il preciso tipo virale presente. Il test Seegene viene inoltre eseguito su campioni citologici che mostrano assenza di infezione HPV al test COBAS ma che mostrano una lesione di alto grado, di basso grado persistente o una lesione citologica dubbia. La corretta e precisa genotipizzazione virale riveste particolare rilevanza clinica perchè permette di identificare e seguire nel tempo la presenza di un determinato tipo virale infettante, monitorando quindi le infezioni persistenti ossia quelle infezioni associate ad un maggior rischio di sviluppare una lesione citologica di alto grado. Inoltre con l’introduzione di vaccini HPV sempre piu’ ad ampio spettro, si rende necessaria una tipizzazione precisa e non limitata soltanto al riconoscimento dei ceppi virali 16 e 18.
Lei ha presentato il test Anyplex™ II HPV28 al Congresso ‘PAP-Test, HPV e vaccino’. Quali sono state le reazioni?
Lo scopo della presentazione era di sensibilizzare i medici ginecologi all’importanza della tipizzazione virale e all’importanza della selezione delle pazienti su cui l’esecuzione del test HPV puo’ dare importanti informazioni cliniche. Il pubblico presente è stato partecipe e curioso nel voler approfondire alcuni aspetti riguardanti la tipizzazione e la quantificazione della carica virale.
Lei ha convalidato il test Anyplex™ II HPV28 per i campioni FFPE. Qual è stata la sua esperienza?
Sono stati analizzati con il test Anyplex™ II HPV28, 56 casi di DNA estratto da FFPE precedentemente analizzati con la metodica di tipizzazione INNO-Lipa HPV Genotyping Extra (Innogenetics). In 50 casi (90%) i risultati di tipizzazione ottenuti sono perfettamente concordanti tra le due metodologie. In due casi, il test Seegene rileva la presenza di un tipo virale a basso rischio non identificato dalla metodica Innolipa. In 4 casi invece i risultati tra le due metodologie sono discordanti per quanto riguarda l’identificazione di tipi virali ad alto rischio: in particolare in 3 casi un tipo virale ad alto rischio viene identificato dalla metodica Innolipa e non dal test Anyplex (in 2/3 l’infezione virale è verosimilmente al limite di detection) mentre in un caso un’infezione ad alto rischio 16 viene identificata solo dal test Anyplex e non dal test Innolipa.
Nel complesso il test Anyplex™ II HPV28 funziona molto bene anche su DNA estratto da FFPE e puo‘ essere quindi utilizzato nella routine diagnostica.
Quali sono i vantaggi rispetto agli strip test che avete usato finora?
Il test Anyplex™ II HPV28 rispetto al test utilizzato precedentemente per la tipizzazione virale è molto piu’ semplice e rapido e in piu’ permette anche di semiquantificare la carica virale.
Come giudica la valutazione e quanto è soddisfatta dei risultati?
Il test Anyplex™ II HPV28 è un test ottimo, rapido, di semplice esecuzione e di semplice interpretazione dei risultati. Abbiamo recentemente partecipato con tale test al controllo qualità organizzato dalla WHO « HPV DNA Proficiency Study 2014 », passandolo con successo. Nel report ricevuto infatti viene riportata la frase : « …your data set using the Seegene Anyplex II H28 assay is proficient for detection of HPV 6, 11, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68a and 68b ».
Quanto lei è soddisfatta con il servizio e il supporto di BÜHLMANN?
Sono molto soddisfatta del servizio e supporto offetto da BÜHLMANN. Le prove iniziali del test, l’installazione dei software necessari all’esecuzione dell’analisi e il training viene eseguito in loco da persone altamente specializzate e preparate che effettuano un corso di formazione di due giorni. Inoltre le risposte a quesiti o problemi tecnici sono sempre rapide ed efficaci.
Grazie per l’intervista.